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產品信息

本產品采用層析式雙抗體夾心法同時檢測目的基因CRISPR酶切產物和LAMP、RAA或RPA，PCR擴增產物。當CRISPR信號探針（A）擴增產物（B）和做如下修飾時，即可使用本產品進行檢測——CRISPR信號探針（A）的一端修飾有生物素（Biotin），另一端修飾有異硫氰酸熒光素（FITC）或6-羧基熒光素（6-FAM）；擴增產物（B）一端修飾有地高辛（Dig），另一端修飾有羅丹明（TAMRA）。

預期用途:

CRISPR單酶切產物和擴增產物的同時檢測。

包裝規格/貨號:

圖1. 單靶標HybriDetect側向層析試紙條（彩虹型）結構示意圖

儲存條件及有效期:

儲存條件：存放于避光干燥處，儲存溫度4~30℃。

有效期：12個月。

操作步驟:

1.??根據檢測樣品數量取出相應數量的試紙條，并在吸收墊（圖1）上做好標記。每根試紙條只能用于單次、2種不同產物的檢測。CRISPR單酶切產物體積為50~100μL時，可直接在200μL PCR反應管中檢測核酸產物，產物體積不足50μL時，需在PCR管內加超純水補足體積至50μL，吸打混勻后，才能用于檢測

2.???LAMP，RAA/RPA，PCR擴增產物的CRISPR酶切反應結束后，打開PCR反應管，將試紙條結合墊端（箭頭端）插入PCR反應管（圖1），液面不得超過結合墊最上端，待判讀區全部浸潤（約需1～2min，外界環境溫度較低時，如冬季，會降低吸水速度，判讀區浸潤時間將會延長），待檢測線（T線）顯色后，可以將試紙條拿出。根據試紙條顯色情況直接讀取檢測結果。

3.??質控線（C線）顯色后10min內觀察結果，10min后判讀無效。

4.??記錄檢測結果，將試紙條密封丟棄在安全處。

圖2. CRISPR單酶切及擴增產物檢測試紙條結果判讀示意

1.???陽性（+）：

試紙條質控線（C線）和2條檢測線（T線）均出現條帶，其中T1為紅色，T2為藍色，C線為紅色；試紙條質控線（C線）不顯色，T1為紅色，T2為藍色時，說明CRISPR體系可進行有效酶切，并激活報告基團顯色，相應的靶基因均可判定為陽性。

試紙條質控線（C線）和其中1條檢測線（T線）出現條帶，其中T1為紅色，C線為紅色，或僅有T1為紅色時，說明明CRISPR體系可進行有效酶切，并激活報告基團顯色，相應靶基因可判定為陽性；T2為藍色，C線為紅色時，說明帶有Dig和羅丹明標記的目的基因擴增產物可判定為陽性。

2.???陰性（-）：

試紙條質控線（C線）為紅色條帶，檢測線（T線）不顯色，判定為陰性結果。

3.無效：

試紙條質控線（C線）和檢測線（T線）均未出現條帶，提示所用的試紙條或擴增試劑可能已經損壞、失效或操作有誤。此時，應仔細閱讀說明書，重新擴增和檢測。如果問題仍然存在，應立即停止使用同一批號的產品，并與當地供應商聯系。

注意事項及安全提示:

1.??本產品應結合探針使用，如探針合成純度不足，探針含游離的Biotin或者游離的FITC時，會導致以超純水為陰性對照的切割產物T線呈現紅色，即陰性對照呈現假陽性結果。

2.??本產品可用于探針合成質量的檢測。調整空白陰性對照中探針的使用濃度至400 nM，并進行切割反應。當試紙條結合墊端浸入Cas12/Cas13切割產物后的5~7 min內，試紙條T線顯紅色，即說明探針純度難以滿足實驗要求，會因探針純度不足導致假陽性結果。建議更換探針合成供應商，并重新合成探針。本產品在探針使用濃度為20~50nM的情況下，試紙條結合墊端浸入Cas12/Cas13切割產物后的30 min內，T線均不會顯色。

3.??本產品僅供科研使用。使用前請仔細閱讀說明書，嚴格按照說明書操作。違反或者未按說明書進行操作可能導致錯誤結果。

4.???產品應依照說明書要求，儲存于合適的環境和溫度下，并在有效期內使用。儲存不當或產品過期可能導致錯誤結果。打開包裝后請盡快使用試紙條，以免因試紙條受潮影響試驗結果。檢測環境光線不足，操作者色弱等因素均可能導致錯誤結果。

5.???使用完畢后，應盡快將紙條裝進密封袋，妥善處理。本產品為一次性使用產品，僅限科研，請勿重復使用。

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