酰基轉移酶（AAT）檢測試劑盒（微量法 100T/96S）
| 貨號 | SH0461 | 售價（元） | 7200 |
| 規格 | 100T/96S | CAS號 |
- 產品簡介
- 相關產品
|
貨號 |
名稱 |
規格 |
|
SH0461 |
酰基轉移酶（AAT）檢測試劑盒（微量法 100T/96S） |
100管/96樣 |
測定意義：
AAT是一個多功能蛋白大家族，主要負責催化生物體內各種酰基化和去酰基化反應，在基因表達、代謝和信號傳導中具有重要作用。
測定原理：
AAT催化乙酰CoA轉移乙酰基到丁醇，釋放的CoA還原DTNB生成TNB；TNB在412nm有吸收峰，測定412 nm吸光度增加速率可計算AAT活性。
組成：
|
產品名稱 |
SH0461-100T/96S |
Storage |
|
提取液：液體 |
100ml |
4℃ |
|
試劑一：液體 |
20ml |
4℃ |
|
試劑二：粉劑 |
1瓶 |
-20℃ |
|
試劑三：粉劑 |
1支 |
4℃避光 |
|
說明書 |
一份 |
|
自備儀器和用品：
研缽、冰、臺式離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋、無水乙醇。
粗酶液提取：
1. 組織：按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液）進行冰浴勻漿。8000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。
細菌、真菌：按照細胞數量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1ml提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
2. 液體：直接檢測。
AAT測定操作：
1、分光光度計/酶標儀預熱30min，調節波長到412 nm，蒸餾水調零。
2、工作液的配制：臨用前在試劑二瓶中加入18ml試劑一，充分混勻待用。用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
3、試劑三的配制：臨用前加無水乙醇1ml充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存。
4、 空白管：在Ep管或96孔板中加入10μL提取液和180μL工作液，充分混勻，35℃反應15min，加入10μL試劑三，充分混勻，25℃靜置10min，測定412nm處吸光值，記為A空白管。
5、 測定管：在Ep管或96孔板中加入10μL樣本和180μL工作液，充分混勻，35℃反應15min，加入10μL試劑三，充分混勻，25℃靜置10min，測定412nm處吸光值，記為A測定管。△A=A測定管- A空白管，空白管只要做一管。
AAT活性計算：
a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下
（1）按照蛋白濃度計算
活性單位定義：每毫克蛋白每分鐘催化產生1nmol TNB定義為一個酶活單位。
AAT (nmol/min/mg prot) = △A ÷（
×d）×V反總÷（V樣×Cpr）÷T = 98.04×△A÷Cpr
（2）按照樣本質量計算
活性單位定義：每克組織每分鐘催化產生1nmol TNB定義為一個酶活單位。
AAT (nmol/min /g 鮮重) = △A ÷（
×d）×V反總÷(W×V樣÷V樣總) ÷T
= 98.04×△A÷W
（3）按細胞數量計算
活性單位定義：每104個細胞每分鐘催化產生1nmol TNB定義為一個酶活單位。
AAT (nmol/min/104cell) = △A ÷（
×d）×V反總÷(細胞數量×V樣÷V樣總) ÷T
= 98.04×△A÷ 細胞數量
（4）按液體體積計算
活性單位定義：每毫升樣品每分鐘催化產生1nmol TNB定義為一個酶活單位。
AAT (nmol/min/ml) = △A ÷（
×d）×V反總÷V樣÷T
= 98.04×△A
：TNB消光系數，13600L/mol/cm；d：比色皿光徑：1cm；V反總：反應總體積，0.2ml；V樣：加入反應體系中上清液體積，0.01ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：蛋白含量，mg/ml；W：樣本質量，g；T：反應時間，15 min。
b.使用96孔板測定的計算公式如下
（1）按照蛋白濃度計算
活性單位定義：每毫克蛋白每分鐘催化產生1nmol TNB定義為一個酶活單位。
AAT (nmol/min/mg prot) = △A ÷（
×d）×V反總÷（V樣×Cpr）÷T
=196.08×△A÷Cpr
（2）按照樣本質量計算
活性單位定義：每克組織每分鐘催化產生1nmol TNB定義為一個酶活單位。
AAT (nmol/min /g 鮮重) = △A ÷（
×d）×V反總÷(W×V樣÷V樣總) ÷T
= 196.08×△A÷W
（3）按細胞數量計算
活性單位定義：每104個細胞每分鐘催化產生1nmol TNB定義為一個酶活單位。
AAT (nmol/min/104cell) = △A ÷（
×d）×V反總÷(細胞數量×V樣÷V樣總) ÷T
=196.08×△A÷ 細胞數量
（4）按液體體積計算
活性單位定義：每毫升樣品每分鐘催化產生1nmol TNB定義為一個酶活單位。
AAT (nmol/min/ml) = △A ÷（
×d）×V反總÷V樣÷T
= 196.08×△A
：TNB消光系數，13600L/mol/cm；d：96孔板光徑：0.5cm；V反總：反應總體積，0.2ml；V樣：加入反應體系中上清液體積，0.01ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：蛋白含量，mg/ml；W：樣本質量，g；T：反應時間，15min。