干細胞金牌基質膠
| 貨號 | 082777 | 售價（元） | 4207 |
| 規格 | 10ml | CAS號 |
- 產品簡介
- 相關產品
產品信息
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貨號 |
產品名稱 |
規格 |
儲存/運輸條件 |
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082777 |
干細胞金牌基質膠 |
10mL |
≤-20°C |
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0827775 |
干細胞金牌基質膠 |
5mL |
≤-20°C |
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082777T |
干細胞金牌基質膠 |
1mL |
≤-20°C |
產品簡介
模基生物干細胞金牌基質膠是一種可溶性的基底膜基質膠，這種基質是通過基因編輯技術將多種表達膠原蛋白的基因序列插入到經永生化處理的小鼠細胞體系中，并在實體中抽提出來的。它的主要成分是層粘連蛋白，接著是膠原蛋白IV、硫酸乙酰肝素蛋白多糖和巢蛋白。基底膜基質也含有轉化生長因子β、表皮生長因子、類胰島素生長因子、成纖維細胞生長因子和在中自然出現的其他生長因子。
推薦應用
干細胞金牌基質膠是一種成熟的hES培養底物。它與特定的培養基結合使用來培養干細胞(例如，hESC, iPSC)。此款干細胞金牌基質膠提供了胚胎干細胞和誘導多能干細胞滋養層培養所需的重復性和一致性，也可用于體內分化研究，如畸形成。
產品參數
來源：小鼠
外觀：①顏色：含酚紅基質膠表現為黃色-粉紅色，無酚紅基質膠表現為半透明淡黃色； ②形態：標準型基質膠4℃溶解后，呈透明流動液態狀態；高濃度基質膠0℃溶解后，呈透明流動液態狀態，4℃久置呈半凝膠狀。
濃度多樣性： 蛋白濃度范圍在8~26mg/mL之間
內毒素： ≤ 4.5EU/ mL
凝膠時間：室溫條件下5-30min凝膠，溫度22°C至37°C時成膠速度加快
2D/3D應用非常廣泛：干細胞研究(分化、維持）、研究（侵襲）、 3D細胞培養（類器官、3D細胞球）、體內植入（皮下、血管生成、栓塞）
產品質量控制規范
• 通過小鼠抗體產物（MAP）檢測進行常規小鼠菌落病原體篩選
• 提取自不含LDEV的小鼠細胞
• 對包括LDEV在內的多種病原體進行廣泛的PCR檢測， 確保對生產過程中使用的原材料進行嚴格控制
• 對細菌、真菌和支原體進行檢測，確保陰性
• 使用BCA方法測定蛋白濃度
• 使用血清學方法檢測內毒素水平
• 在37℃下進行14天的凝膠穩定性測試
• 每批次產品進行生物學功能驗證（類器官培養與分化實驗；皮下實驗；干細胞培養；血管生成實驗等）
• 對包括LDEV在內的多種病原體進行廣泛的PCR檢測， 確保對生產過程中使用的原材料進行嚴格控制
使用注意事項
實驗環境
• 環境溫度：20–25℃ ；環境濕度：40–60%。
• 請穿戴個人防護裝置，注意實驗室安全。
溫度控制
• 基質膠產品儲存在-20℃時是穩定的。通過分裝并一次性使用分裝物來盡可能減少產品的凍融次數。在-20℃冰箱中儲存分裝物直到準備使用。請不要儲存在無霜冰箱中。請務必保持產品的凍存狀態。
• 因為模基生物干細胞金牌基質膠 在10℃以上會開始凝膠化。所以需謹記：模基生物干細胞金牌基質膠 和所有與模基生物干細胞金牌基質膠 接觸的培養皿或培養基都應該預冷。在實驗的全部過程中請務必保持模基生物干細胞金牌基質膠 處于冰上。
避免污染
• 實驗操作人員需嚴格區分實驗操作臺、清潔區和污染區，確保插取吸頭、加樣、丟棄吸頭的動作呈單向流動。
• 實驗后使用含 0.5% 次氯酸的消毒液對實驗操作區消毒。
其他
• 請將基質膠產品小瓶淹沒在碎冰中，并放置在4℃冰箱里過夜解凍模基生物基質膠，蛋白濃度高時可能需要更多時間。請將模基生物干細胞金牌基質膠 全程保持在冰上。無論是開蓋取用產品或者對產品進行分裝，請保持無菌操作。
• 操作過程中，需使用預冷的移液管輕柔地吹打混勻模基生物干細胞金牌基質膠 以確保其均勻性。將模基生物干細胞金牌基質膠 分裝到離心管中，每當模基生物干細胞金牌基質膠 堵塞吸頭和/或移液管測量不精確時請更換吸頭。如果將產品放置在4℃的冰上 24-48個小時，凝膠化的模基生物干細胞金牌基質膠 可能會被重新水化。
操作說明
分裝操作說明
基質膠產品儲存在-20℃時是穩定的。通過分裝并一次性使用分裝物來盡可能減少產品的凍融次數。以下為實驗操作者進行分裝操作說明。
1.將基質膠置于預冷盒或碎冰中，放入 4℃冰箱，過夜解凍。
2.將無菌離心管、無菌槍頭等接觸基質膠的耗材放預冷盒中或冰箱中預冷，分裝前將融化好的基質膠表面清潔后放入預冷盒或碎冰上。
3.在潔凈工作臺中，用1mL移液槍吸取250µL基質膠到離心管里(或根據每次用量多少進行分裝)，標注好信息，操作過程中盡量保持低溫，縮短操作時間。
4.分裝完成后放冰盒中，防止傾倒，并于冰箱保存。分裝后放置于-20℃冰箱中儲存備用。請不要儲存在自動除霜的冰箱中儲存。使用前將基質膠插入預冷盒或碎冰中，并放置于4°C冰箱中，在冰上過夜解凍，使基底膜基質膠在穩定的低溫環境中緩慢充分融化。
使用方法說明
包被涂層方法
模基生物干細胞金牌基質膠 可以以幾種方式使用。薄層凝膠法適用于在凝膠頂部接種細胞，厚層凝膠法允許您在三維基質內培養細胞，薄層包被法(不凝膠化)給您提供了復雜的蛋白質層，您可以在其上培養細胞。您的選擇基于您想要實現的最終結果，無論是細胞生長、附著還是分化。
一、薄層凝膠法
1.依照推薦的方法解凍模基生物基底膜基質。使用預冷的移液管，將模基生物 基底膜基質混合至均勻。
2.將培養板放置在冰上，以 50 µl/cm2 向生長表面加入模基生物 基底膜基質。
3.將培養板放置在 37 ℃，30 分鐘。
4.如果有必要的話，請在使用無血清培養基輕柔漂洗前吸出未結合的材料。請確保移液器的吸頭不要刮擦包被的表面。培養板現在可以使用了。
二、薄層包被法
1.依照推薦的方法解凍模基生物基底膜基質。使用預冷的移液管，將模基生物 基底膜基質混合至均勻。
2.使用無血清培養基將模基生物基底膜基質稀釋到需要的濃度。對于您的實驗應用，您應該完成以經驗為主的研究來確定您的最適包被濃度。
3.向被包被的容器中加入稀釋的模基生物 基底膜基質。加入的量應該足以容易地覆蓋整個生長表面。在室溫下培養 1 個小時。
4.吸出未結合的材料并使用無血清培養基輕柔地漂洗。培養板現在可以使用了。
三、厚層凝膠法
1.依照推薦的方法解凍模基生物基底膜基質。使用預冷的移液管，將模基生物 基底膜基質混合至均勻。
2.將培養板放置在冰上。向模基生物基底膜基質中加入細胞并使用預冷的移液管懸浮。以150-200µl/cm2 向生長表面加入模基生物 基底膜基質。
3.將培養板放置在37℃，30分鐘。現在可以添加培養基了。細胞也可以培養在這一凝膠的頂部。
細胞復蘇：
使用細胞復蘇溶液在冰上 7 小時內解聚模基生物基底膜基質能夠實現將生長在模基生物基底膜基質上的細胞最有效地復蘇，或者使用中性蛋白酶，考慮到連續培養，中性蛋白酶作為一種金屬酶可以分散細胞。
應用操作說明
以下以以誘導多能干細胞培養為例來進行模基生物干細胞金牌基質膠的應用實驗操作說明。
一、培養材料
1、試劑：模基生物干細胞金牌基質膠(貨號082777/0827775/082777T)；ROCK 抑制劑(Y-27632)；DMEM F12/DMEM；mTeSR1/E8 培養基；Accutase 解離劑、PBS(D-PBS)
2、耗材：無菌槍頭、六孔板、無菌 EP 管。
二、培養準備
1、材料預冷:
a、將模基生物干細胞金牌基質膠置于冰盒中，放入 4℃冰箱，使膠能過夜緩慢融化;
b、4℃預冷無菌離心管、無菌槍頭、六孔板、DMEM F12/DMEM；
2、將干細胞金牌基質膠以1:80或1:100比例進行稀釋：
a.將適量 4℃的 DMEM F12/DMEM 移入冷卻的 15/50 mL EP 中；
b、使用移液器將預冷的槍頭從 EP 管吸取 DMEM F12/DMEM 中移入分裝好的干細胞金牌基質膠，再吸取轉移至 EP 管內；重復幾次，直到基質膠完全移入到 EP 管中。
c、按比例混合后作為儲備基質膠混合液，進行后續鋪板;
3、制作基質膠涂層
a、按 1mL/孔將基質膠混合液加入預冷的六孔板中，輕輕晃動以確保混合液均勻鋪在板上;
b、將 6孔板轉移到 37℃孵育過夜(板材可以在孵育一小時后即可使用，但過夜孵育的涂層對細胞培養效果更佳);
c、使用前吸去涂層上方液體。
4、配置 ROCK 抑制劑(Y-27632)工作液:使用無菌 PBS 將 Y-27632溶解，配置成10mM溶液(1000X)，工作濃度為 10uM;
5、配置含 ROCK 抑制劑 mTeSR1/E8 培養基:將 10mM 溶液加入 mTeSR1/E8 培養基至終濃度為 10uM。
注意:基質膠在>4℃時會逐漸聚合成膠，請嚴格把控操作溫度，控制操作時間;稀釋后的基質膠混合液同樣需要冰上操作。
三、細胞培養
1、復蘇 iPSC
a.從液氮罐或干冰中取出 ipsc，37℃水域中解凍，解凍應迅速完成;
b.用 75% 酒精消毒凍存管后轉移到超凈臺/生物安全柜;
c.將細胞溶液轉移到新的 15ml EP 管中，用 DMEM F12/DMEM 沖洗凍存管兩次
d.室溫 300g 離心5min(ipsc對于200-300g的轉速都有較好的耐受性,建議使用300g來最大限度捕捉細胞，標準程序下建議使用 200g)
e.棄上清，用 2mL 含有 ROCK抑制劑的培養基輕柔地重懸iPSC后轉移到用鋪好板的孔中，前后搖動使得細胞均勻分布(建議將每瓶細胞 1*106裝在六孔板的一個孔內使細胞存活率最大化)
f.將六孔板放回 37℃培養箱，(請在細胞被轉移后立即執行，避免細胞中央密度增加)
g.次日撤去 ROCK 抑制劑，即用無抑制劑的培養基替代含抑制劑的培養基培養細胞。
注意:細胞培養過程中不提倡使用抗生素，其會干擾細胞和其分化潛能;培養環境應與其他細胞隔離，兩次傳代后檢測支原體;DMSO 在室溫下對細胞有毒，復蘇步驟應快速完成。
2、iPSC 傳代
a.將培養上清吸去，用 1mL 的 PBS 清洗后加入 1mL Acuutase
b.轉移到37℃培養箱3分鐘，或在顯微鏡下觀察直到大部分細胞脫落(若細胞仍然附著可將培養板放在手上，另一手輕輕在你的手上拍打使板發生輕微震動從而使細胞脫落);
c.傳代前準備好基質膠涂布的六孔板
d.傾斜培養板，將 Accutase 溶液沿培養層表面轉移兩次，分離結塊并轉移到離心管中
e.用 DMEM F12/DMEM 沖洗培養層表面，并與管中的細胞溶液合并(使用 DMEM/F12或用 PBS 洗滌，建議使用至少 5%的培養基，有利于隨后的造粒和附著);
f.室溫下 300g 離心五分鐘
g.吸去上清，用含有 ROCK 抑制劑的培養基進行重懸，
h.將細胞加入到涂層板中，輕輕搖動使細胞分布均勻;
i.將培養板放入 37℃培養箱中孵育。
注意:IPSC生長為單層后則會迅速分化并死亡，為了保持生長和多能性，需在其長滿前進行傳代。
3、iPSC細胞凍存
a.準備細胞和解離液，在解離液解離細胞過程中，將培養基與 10%DMSO 混合，在凍存管上貼好標簽，配置好凍存液(可選 20%血清或血清替代物提高存活率， 也可以使用 90%胎牛血清